行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

常見問題

首頁

微生物日常檢測過程中常見問題解決小技巧！

在微生物檢測中常會遇到以下問題，可用以下解決方案

為什么劃不出單個菌落？

（1）平板上有過多的水分；

（2）在劃線時沒有反復(fù)灼燒接種環(huán)；

（3）多區(qū)劃線，三區(qū)或四區(qū)劃線，越是稀釋到4區(qū)，間距要越寬。

培養(yǎng)基配制時應(yīng)注意的問題

①嚴(yán)格控制滅菌溫度，需要按照要求進(jìn)行滅菌操作。如果培養(yǎng)基的含糖量較高，那么滅菌溫度就不能太高，否則就會使糖分焦化，從而影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。

②不能反復(fù)融化瓊脂培養(yǎng)基，這會對培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分產(chǎn)生破壞。

③不能對培養(yǎng)基進(jìn)行反復(fù)滅菌，這同樣也會對營養(yǎng)成分產(chǎn)生破壞作用。

④在對瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌后需要將其充分搖勻。

⑤需要將培養(yǎng)基完全溶解才能分裝培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基的保存

（1）平板：大多數(shù)平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

（2）干粉培養(yǎng)基：避光干燥，結(jié)塊后不能使用。

（3）亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時，要常溫解凍，不能使用水浴加熱。

（4）抗生素類：冷藏保存，溫度過高會導(dǎo)致靈敏度的下降。

（5）兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會影響結(jié)果。

觀察時間的掌握

按SN、GB等標(biāo)準(zhǔn)或培養(yǎng)基的使用說明所述時間進(jìn)行觀察，時間過短或時間過長，單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基，時間短單菌落看不到卵磷脂環(huán)，時間長綿羊李氏菌也會產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此，時間過長，李氏菌使整個平板成黑色，不利于觀察單個菌落。霉菌要3天后要及時觀察計數(shù)，防止時間長成一片。

添加劑的添加

（1）溫度的掌握:卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。

（2）定量: 過多會抑制一些目標(biāo)菌，太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長。

培養(yǎng)溫度的掌握

（1）真菌類：25-28℃培養(yǎng)

（2）細(xì)菌類：李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在30℃左右。

（3）其他一般在36℃左右

常見抗生素抗菌譜

β-內(nèi)酰胺類

青霉素：

青霉素對溶血性鏈球菌等鏈球菌屬，肺炎鏈球菌和不產(chǎn)青霉素酶的葡萄球菌具有良好抗菌作用。對腸球菌有中等度抗菌作用，淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、白喉棒狀桿菌、炭疽芽孢桿菌、牛型放線菌、念珠狀鏈桿菌、李斯特菌、鉤端螺旋體和梅毒螺旋體對本品敏感。本品對流感嗜血桿菌和百日咳鮑特氏菌亦具一定抗菌活性，其他革蘭陰性需氧或兼性厭氧菌對本品敏感性差.本品對梭狀芽孢桿菌屬、消化鏈球菌、厭氧菌以及產(chǎn)黑色素擬桿菌等具良好抗菌作用，對脆弱擬桿菌的抗菌作用差。青霉素通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁四肽則鏈和五肽交連橋的結(jié)合而阻礙細(xì)胞壁合成而發(fā)揮殺菌作用。對革蘭陽性菌有效，由于革蘭陰性菌缺乏五肽交連橋而青霉素對其作用不大。

阿莫西林：

敏感菌：鏈球菌A、B、C、F、G 和非分組型、單核細(xì)胞增多性李斯特菌、白喉?xiàng)U、奈瑟腦膜炎雙球菌、百日咳桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌屬、丙酸桿菌、消化鏈球菌、牛鏈球菌、沙門菌、真細(xì)菌屬、放線菌、鉤端螺旋體、梅毒螺旋體。不穩(wěn)定性敏感菌：青霉素敏感性或耐藥性肺炎球菌、腸糞鏈球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、志賀菌、霍亂弧菌、流感嗜血菌、淋病奈瑟球菌、梭狀桿菌。耐藥菌：葡萄球菌、卡他菌屬、產(chǎn)酸克雷白桿菌、肺炎克雷白桿菌、普通變形桿菌、假單孢菌屬、不動桿菌、彎曲桿菌、韋榮球菌、支原體、立克次體、軍團(tuán)菌屬、分歧桿菌、脆弱桿菌。

氨芐西林：

對革蘭陽性球菌和桿菌(包括厭氧菌)的抗菌作用基本與青霉素相同，但對糞球菌的作用較后者為弱。革蘭陰性細(xì)菌中腦膜炎球菌、淋球菌、流感桿菌、百日咳桿菌、布氏桿菌、變形桿菌、沙門菌等皆對藥品敏感。多數(shù)大腸桿菌及某些志賀菌屬也對藥品敏感，但后者可迅速出現(xiàn)耐藥性。氨芐西林對軍團(tuán)菌和胎兒彎曲桿菌有抗菌作用。除脆弱類桿菌外，其余厭氧革蘭桿菌多對本品敏感。

頭孢氨芐：

除腸球菌屬、甲氧西林耐藥葡萄球菌外，肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、產(chǎn)或不產(chǎn)青霉素酶葡萄球菌的大部分菌株對本品敏感。本品對奈瑟菌屬有較好抗菌作用，但流感嗜血桿菌對本品的敏感性較差；本品對部分大腸埃希菌、奇異變形桿菌、沙門菌和志賀菌有一定抗菌作用。其余腸桿菌科細(xì)菌、不動桿菌、銅綠假單胞菌、脆弱擬桿菌均對本品呈現(xiàn)耐藥。梭桿菌屬和韋容球菌一般對本品敏感，厭氧革蘭陽性球菌對本品中度敏感。

氨基糖苷類

慶大霉素：

本品為氨基糖甙類廣譜抗生素，對多種革蘭陰性菌及陽性菌都具有抑菌和殺菌作用。對綠膿桿菌、產(chǎn)氣桿菌、肺炎桿菌、沙門氏菌屬、大腸桿菌及變形桿菌等革蘭陰性菌和金葡菌等作用較強(qiáng)。

丁胺卡那霉素：

抗菌譜與慶大霉素相似，對大腸桿菌、綠膿桿菌、吲哚陰性和陽性變形桿菌、克雷白桿菌、不動桿菌、枸櫞酸桿菌。以及沙雷桿菌和腸桿菌的部分菌株有良好的抗菌作用。對于結(jié)核桿菌、非典型性分支桿菌和金黃色葡萄球菌（產(chǎn)酶和不產(chǎn)酶株）也有良好抗菌作用。其他革蘭陽性球菌（包括糞鏈球菌）、厭氧菌、立克次體、真菌和病毒均對本品不敏感。本品的耐酶性能較強(qiáng)，當(dāng)微生物對其他氨基糖苷類耐藥后，對本品還常敏感。

鏈霉素：

對結(jié)核分枝桿菌有強(qiáng)大抗菌作用，其最低抑菌濃度一般為0.5mg/ml。非結(jié)核分枝桿菌對本品大多耐藥。鏈霉素對許多革蘭陰性桿菌如大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形桿菌屬、腸桿菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、布魯菌屬、巴斯德桿菌屬等也具抗菌作用；腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌亦對本品敏感。鏈霉素對葡萄球菌屬及其他革蘭陽性球菌的作用差。各組鏈球菌、銅綠假單胞菌和厭氧菌對本品耐藥。

氯霉素：

對革蘭陽性、陰性細(xì)菌均有抑制作用，且對后者的作用較強(qiáng)。其中對傷寒桿菌、流感桿菌、副流感桿菌和百日咳桿菌的作用比其他抗生素強(qiáng)，對立克次體感染如斑疹傷寒也有效，但對革蘭陽性球菌的作用不及青霉素和四環(huán)素。抗菌作用機(jī)制是與核蛋白體50S亞基結(jié)合，抑制肽酰基轉(zhuǎn)移酶，從而抑制蛋白質(zhì)合成。

四環(huán)素：

為廣譜抑菌劑，高濃度時具殺菌作用。除了常見的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌以及厭氧菌外，多數(shù)立克次體屬、支原體屬、衣原體屬、非典型分枝桿菌屬、螺旋體也對本品敏感。本品對革蘭氏陽性菌的作用優(yōu)于革蘭氏陰性菌，但腸球菌屬對其耐藥。其他如放線菌屬、炭疽桿菌、單核細(xì)胞增多性李斯特菌、梭狀芽孢桿菌、奴卡菌屬等對本品敏感。

糖肽類

萬古霉素：

可抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，對金黃色葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌等作用強(qiáng)，對難辨校狀芽孢桿菌、炭疽桿菌、白喉?xiàng)U菌等作用也良好。與其他抗生素?zé)o交叉耐藥性，極少耐藥菌株。

大環(huán)內(nèi)酯類

紅霉素：抗菌譜和青霉素相似，主要是對革蘭陽性菌如金葡菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉?xiàng)U菌、炭疽桿菌及梭形芽胞桿菌等，均有強(qiáng)大抗菌作用。對革蘭陰性菌如腦膜炎雙球菌、淋球菌、百日咳桿菌、流感桿菌、布氏桿菌、部分痢疾桿菌及大腸桿菌等有一定作用。

磺胺類

磺胺類藥對許多革蘭氏陽性菌和一些革蘭氏陰性菌、諾卡氏菌屬、衣原體屬和某些原蟲（如瘧原蟲和阿米巴原蟲）均有抑制作用。在陽性菌中高度敏感者有鏈球菌和肺炎球菌；中度敏感者有葡萄球菌和產(chǎn)氣莢膜桿菌。陰性菌中敏感者有腦膜炎球菌、大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、肺炎桿菌、鼠疫桿菌。

磺胺嘧啶：

對革蘭陽性及陰性菌均有抑制作用，可用于腦膜炎雙球菌、肺炎球菌、淋球菌、溶加鏈球菌感染的治療，能通過血腦屏障進(jìn)入腦脊液，曾被用于治療流行性腦膜炎的首選藥。抗菌機(jī)制是通過與對氨基苯甲酸（PABA）競爭細(xì)菌的二氫葉酸合成酶，導(dǎo)致細(xì)菌體內(nèi)葉酸合成受阻而使細(xì)菌的生長、繁殖受挫。本品屬中效磺胺,對非產(chǎn)酶金葡菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬等腸桿菌科細(xì)菌、淋球菌、腦膜炎球菌、流感嗜血桿菌具有抗菌作用。

喹諾酮類

氧氟沙星：

對需氧革蘭陰性桿菌的抗菌活性高，對下列細(xì)菌在體外具良好抗菌作用：腸桿菌科的大部分細(xì)菌，包括枸椽酸桿菌屬、陰溝、產(chǎn)氣腸桿菌等腸桿菌屬、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形桿菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、弧菌屬、耶爾森菌屬等。常對多重耐藥菌也具有抗菌活性。對青霉素耐藥的淋病奈瑟菌、產(chǎn)酶流感桿菌和莫拉菌屬均具有高度抗菌活性。對銅綠假單胞菌等假單胞菌屬的大多數(shù)菌株具抗菌作用。本品對甲氧西林敏感葡萄球菌具抗菌活性，對肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌和糞腸球菌僅具中等抗菌活性。

諾氟沙星：

尤其對需氧革蘭陰性桿菌的抗菌活性高，對下列細(xì)菌在體外具良好抗菌作用：腸桿菌科的大部分細(xì)菌，包括枸椽酸桿菌屬、陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌等腸桿菌屬、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、弧菌屬、耶爾森菌等。諾氟沙星體外對多重耐藥菌亦具抗菌活性。對青霉素耐藥的淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌亦有良好抗菌作用。

環(huán)丙沙星：

抗菌譜同諾氟沙星，其抗菌活性是目前廣泛應(yīng)用的氟喹諾酮類中最強(qiáng)者。除對革蘭陰性桿菌有高度抗菌活性外，尚對葡萄球菌屬具有良好抗菌作用，對肺炎球菌、鏈球菌屬的作用略差于葡萄球菌屬。

硝基呋喃類

呋喃唑酮：

為殺菌劑, 具有較廣的抗菌譜, 最敏感菌為大腸桿菌，炭疽桿菌，副傷寒桿，痢疾桿菌，肺炎桿菌，傷寒桿菌對之亦敏感。主要用于敏感菌所致的細(xì)菌性痢疾，腸炎、霍亂，也可以用于傷寒、副傷寒、賈第鞭毛蟲病、滴蟲病等。與制酸劑等藥物合用可治療幽門螺桿菌所致的胃竇炎。